jinhak

내용 요약

• 방향설정: 쥐와 인간의 발생 과정에서의 RNA dynamics에 관한 논문, 장 오가노이드 분화 과정에서 mRNA 발현 수준을 관찰한 논문을 통해 ‘RNA 전사속도가 세포 정체성에 영향을 미친다’는 가설 설정, 이것이 인간 대뇌 오가노이드 발생 과정에서 적용되는지를 알아보고자 함.

• 사전연구: 세포의 종류(정체성)을 확인할 수 있는 방법, RNA dynamics를 확인할 수 있는 방법을 알아보고 구체적인 실험 계획을 세움.(인간 대뇌 오가노이드는 조교님께서 미리 키워놓아주심)

• 이미지 정량: Immunostaining, 5-EU 처리, 핵 염색 등을 통해 오가노이드와 그 속 각 세포를 현미경으로 보기 용이하게 가공하고, 공초점 현미경을 활용하여 특정 채널 빛에서 오가노이드 내 세포의 형광 신호 양상을 관찰한다. 이후 이 형광 신호를 프로그램을 이용하여 정량화함.

• 화학적 정량: 5-EU 처리된 오가노이드를 single cell 단위로 분리하고 유세포분석기(FACS)를 이용하여 neuron과 neural progenitor cell(NPC)로 분류한다. 이후 각 세포에 대해 RT-qPCR을 진행하여 neuron과 NPC 각각에서 그에 해당하는 marker DNA가 관찰됨을 확인함으로써 이미지 정량의 결과가 타당함을 입증함.

• 결과 분석 및 결론 도출: 인간 대뇌 오가노이드 발생 과정에서 RNA dynamics는 세포 정체성에 영향을 미침.

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이정희 멘토

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